貼壁細(xì)胞接收注意事項(xiàng)

貼壁細(xì)胞經(jīng)過快遞運(yùn)輸顛簸會出現(xiàn)漂浮脫落等情況： 收到先放培養(yǎng)箱靜置穩(wěn)定。如有脫落需收集處理，處理細(xì)節(jié)請查閱以下信息，原瓶內(nèi)為運(yùn)輸培養(yǎng)液，血清含量只有5%，需及時(shí)更換專用wan全培養(yǎng)基。

收到細(xì)胞后請把細(xì)胞圖片狀態(tài)發(fā)到群， 根據(jù)圖片可以給出接下來的處理建議（傳代或者換液），建議一比二傳代至2個(gè)T25。 

貼壁細(xì)胞傳代步驟： 準(zhǔn)備工作：胰酶和wan全培養(yǎng)基（需要提前37度復(fù)溫）、PBS（常溫）避免細(xì)胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養(yǎng)液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞。貼壁細(xì)胞傳代步驟： 準(zhǔn)備工作：胰酶和wan全培養(yǎng)基（需要提前37度復(fù)溫）、PBS（常溫）避免細(xì)胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養(yǎng)液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞。

（4） 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時(shí)及時(shí)關(guān)注消化時(shí)間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大，顯微鏡下看細(xì)胞呈單個(gè)游離狀態(tài)，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化，可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。（消化時(shí)主要看消化狀態(tài)，如果沒有變圓，側(cè)立時(shí)不能滑落時(shí)，可以適當(dāng)延長消化時(shí)間，每30s觀察一次細(xì)胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打（不要太用力）使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。

（6） 收集細(xì)胞懸液離心，1000rpm/min（約250g） 5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮wan全培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足wan全培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

（8） 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。

這個(gè)是貼壁細(xì)胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細(xì)胞wan全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以出現(xiàn)滑落時(shí)再終止消化。

消化到這樣的成游離狀態(tài)，后續(xù)輕輕稍微吹一下即可很好的分散細(xì)胞

后續(xù)處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細(xì)胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細(xì)胞影響細(xì)胞狀態(tài)）換液時(shí)候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗

（4） 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時(shí)及時(shí)關(guān)注消化時(shí)間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大，顯微鏡下看細(xì)胞呈單個(gè)游離狀態(tài)，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化，可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。（消化時(shí)主要看消化狀態(tài)，如果沒有變圓，側(cè)立時(shí)不能滑落時(shí)，可以適當(dāng)延長消化時(shí)間，每30s觀察一次細(xì)胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打（不要太用力）使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。

（6） 收集細(xì)胞懸液離心，1000rpm/min（約250g） 5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮wan全培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足wan全培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

（8） 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。

這個(gè)是貼壁細(xì)胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細(xì)胞wan全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以出現(xiàn)滑落時(shí)再終止消化。

消化到這樣的成游離狀態(tài)，后續(xù)輕輕稍微吹一下即可很好的分散細(xì)胞

后續(xù)處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細(xì)胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細(xì)胞影響細(xì)胞狀態(tài)）換液時(shí)候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗 。